竞争性抑制剂结构与底物类似，与酶形成可逆的EI复合物但不能分解成产物P。抑制剂与底物竞争活性中心，从而阻止底物与酶的结合。这就相当于同样底物浓度下与酶的结合能力变弱了，所以竞争性抑制剂使Km增大，Km'=Km(1+I/Ki)。但只要酶与底物结合，之后的催化并不受影响，所以Vm不变。
非竞争性抑制剂可以和底物同时与酶结合，形成三元复合物ESI。所以与底物没有竞争，Km不变。但形成的中间物ESI不能分解成产物，因此酶活降低，Vm变小。非竞争抑制剂与酶活性中心以外的基团结合，大部分与巯基结合，破坏酶的构象，如一些含金属离子（铜、汞、银等）的化合物。EDTA络合金属引起的抑制也是非竞争抑制，如对需要镁离子的己糖激酶的抑制。
反竞争性抑制剂与酶-底物复合物ES结合，生成三元复合物ESI。这相当于使ES多了一个出路，降低了ES浓度，可以促进ES生成，所以Km减小。但是生成的复合物不能生成产物，所以Vm变小。
