流程如下:

1、 Taq DNA聚合酶: Taq酶有多种种类,热启动酶、高保真酶,根据各自实验的应用选择适当的酶扩增,一般反应中,热启动酶经化学修饰后即可顺利完成,热启动酶的化学修饰可以避免在低温下产生任何非特异性的产物。酵素浓度对扩增效果有一定影响,酵素用量过大,会产生非特异性产物,请遵照使用说明。

2、 dNTP:四个 dNTP的浓度是一样的,如果其中任何一个浓度过高或过低,就会引发错误的碱基渗透。另外, dNTP还可以与该体系中的镁离子结合,从而影响该体系中镁离子的含量。

三、缓冲液:缓冲液通常与酶一起供应,一般 PCR试剂盒包括酶、缓冲液、 dNTP、水。初始扩增,可完全按照试剂盒说明书进行操作,若扩增结果有问题,可自行摸索实验条件或重新设计引物提取模板。

由于空气中和手部有污染源,操作时应戴手套,在清洁的环境下配置反应系统,以防止空气中的污染源。

五、 PCR扩增的水要经过高压消毒或0.2 um滤膜过滤。

6、产物切胶在回收二次扩增之前,首先对二次扩增模板进行1000倍稀释。

4、常用试剂的配方